Комментарии 63
Ламинар получился очень милый. А Белизну покупайте лучше в магазинах «все для стоматолога», ибо в остальных случаях концентрации плавают от… и до…
Попробуй использовать для стерилизации таблетки ДезТАБ (удобнее будет подобрать необходимую концентрацию). Еще хорошо подойдет доместос. Если используешь обычную белизну или дезТАБ добавляй пару капель Твина или любого ПАВа, даже обычного шампуня. Делай несколько промывок дисстилятом после стерилизации. В режиме используй спирт, доместос. Если зарастает грибами, то можно использовать противогрибковые препараты (а-ля нитрат серебра), если бактериями, то в среду можешь добавить антибиотики (во многих случаях никакая стерилизация от них не спасет, потому-что существуют чудесные внутриклеточные микоплазмы).
На фото от 2 августа у тебя образуется каллус? ( плохо видно). Если не ошибаюсь около ближнего экспланта бактериальная инфекция (либо фенолы). Я бы рассадил.
Для клонального микроразмножения орхидей мы использовали поллинарий.
Чтобы не "увядали" экспланты можешь использовать чашку Петри с увлажненной фильтровальной бумагой после стерилизации (предварительно сухожар, ну или в домашних условиях можно "автоклавировать и стерилизовать" в микроволновке)
Пробирки можешь закрывать ватно-марлевыми турундами.
Интересно, что у тебя со световым режимом?
Посмотри статьи Теплицкая, Митрофанова
Большое вам спасибо!
Обязательно посмотрю статьи.
Ватно-марлевые пробки - знаю, что они хорошо подходят, но почему-то не хочется с ними возиться.
Про поллинарий тоже почитаю. Не знаю, что это.
На фото от 2 августа каллуса вроде бы нет. Просто побег растёт. Бактерия - да, там есть. Вот думаю, что с ней делать. По идее надо как-то перестерилизовать и пересадить, но не знаю, что наверняка сможет с ней справиться, поэтому пока не трогаю. Наверное надо на этапе первоначальной посадки добиваться полной стерильности. Может быть как-то пролечивать материнское растение, купить эксплантов в антибиотиках?...
ДезТаб тоже посмотрю ? ещё раз благодарю за интерес и за советы!
Тогда можете автоклавировать пробирки (да и колбы), покрытые жесткой фольгой. Вырезаете квадратики, закрываете ими пробирки (фольга бывает разной, обычно продают тонкую, но лучше найти потолще). В процессе работы в ламинарном боксе она может порваться, поэтому дополнительно сделайте заготовку таких квадратиков и простерилизуйте в духовке или автоклаве (предварительно завернув в бумагу). Перед тем как закрывать пробирку "обжаривайте" над горелкой. После закрытия делайте прокручивающее движение обеими руками в противоположных направлениях, чтобы плотно зафиксировать фольгу на пробирке. Отдельно подготовьте пищевую пленку, для этого ее нужно закатать в плотный рулон и нарезать на сантиметровые рулоны, которыми дополнительно нужно заворачивать пробирки в месте фиксации фольги и пробирки. Если бактерия на растущем побеге, то можно конечно попытаться спасти ее, попробуйте добавить антибиотик в среду. Если пересаживаете не забывайте про эффект кондиционирования, соблюдайте соотношение объем среды/эксплант. В большом объеме среды небольшой эксплант зачахнет, т.е. такой один побег лучше отрезать от исходного экспланта и пересадить в пробирку.
уважение!
Похоже вашему отцу нужен зятем Ниро Вульф.
один Ниро Вульф тут уже есть,
нужен Арчи Гудвин :)
Не представляете, как вы близки к истине. Сообщника-помощника действительно хочется ?
Помощником у него Теодор Хорстман, а на Арчи это нагоняло тоску:
Просмотрев утреннюю корреспонденцию, я занялся данными о произрастании и цветении орхидей. Я их перепечатывал на отдельных карточках, принесенных из оранжереи, делая записи вроде следующей: "27 банок удобрения без следов плесени через автоклав 18 фунтов 18, 4, 61", - я с тоской ожидал звонка либо от Ноэля, либо от Маргот, и даже от их родительницы. Но до одиннадцати, когда вниз спустился Вулф, никто и не позвонил.
Арчи был его помощником в детективных делах, в основном занятии. Вот я о таком же)
Тот помощник у него был для цветочков, а нужен для вот таких случаев:
Когда проект был разработан, а все необходимые материалы закуплены, мы закрылись с папой в гараже и примерно через неделю вышли оттуда с готовым ламинаром.
что-то нетривиальное сделать (по эскизу автора) руками, подать-принести тяжелое - обязательно нужен помощник!
Сомнительный жених? но коллекция у него впечатляющая?
Hi,
Just read your article. Wonderful, beautiful. Huge respects for building LFH by hand (still struggling with it, even after year of preparations.).
About chemicals you would need, go at https://phygenera.de/ . They got all vitamins, Agar, PGM's, etc (Also parafilm, you will love to use it for covering things.)
All the best..
Thank you very much?. I will definitely look at this store. The main thing is that there are no problems with payment.?
You're welcome. about other ingedients (which are not on phygenera) and/or if you need some professional hardware/reagents/books, try to look me up, Will be only glad to help even with sending them from EU to you :)
Absolutely np. if you'll struggle finding some clean metal salts, let me know. I think I can help with them.
NaOCl you can make from Ca(OCl)2 and some sodium carbonate or sulfate or such.
In case you're worrying precipitating transition metal salts after time (Fe, Mn and Mo tend to do it, along with others). Try to have them already chelated with organics (EDTA/EDDHA/etc) (You can find them on phygenera) or just do them before making solution (quite annoying) (Just make sure chelating agent is not toxic and/or subtract anion mass from main mass, if you do them separately(in MS medium you got EDTA, so if you add MnEDTA, just add less amount of EDTA acid itself)
You also can try to use some UV-A lamp for desinfection, quite clean and convinient way, if it's not destroying reagents :)
And one last thing. In case you're struggling with pH, try to add buffers (MES is most popular, imho, but you can experiment/try other ones too).
P.S. Linux/unix system deployment engineer here :)
Thanks a lot for the tips!?
I didn't really understand what "subtract anion mass from main mass" means. What anions are you talking about?
About the buffers - a good idea) Thanks!
I mean, if your medium already contains EDTA as free acid (usually orchid mediums do this) and you'll be adding MnEDTA as Mn source (not sulfate, as it usually is added), just subtract mass of EDTA anion in MnEDTA from EDTAacid mass of medium.
That's it, I get it. I just haven't seen medium with free EDTA, so I didn't understand how it could be.
mmmmm.. I went after this medium: https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/286/522/p6793dat.pdf
Works as charm, as people say.
Wow! That is orchid multiplication medium! Thank you very much!
np :) For preparations, I'd recommend going for YT video XVdw2IP1Smw . If you can somehow stand accent, he's very good at explaining how and why and when to add.
P.S. Are you after only tissue culture or diving even deeper? (DNA modifications/sequencing/CRISPR/a bit of biochem/bioinfo?)
Thanks a lot for the video! The Indian accent is very understandable for Russian ?.
So far I'm only interested in tissue culture. I want to deal with at least this. But I am also interested in the listed directions. Maybe in the distant future...
OK, last post and I stop spamming.
Was going to write "it's not that bad or hard", but it would be complete lie. It is hard and difficult and very expensive. But if one day you'll go in, you'll be amazed... You can make, for example, orchid, which can glow in dark only after 30C ambient temp. Or something else, limited by your fantasy only. CRISPR hardware and reagents also can be ordered and they are not even expensive (last time I had a look, guy was preparing for mass production of nano-syringe for DNA injection directly into nucleus). You can find polymerases and other stuff on ebay. Look for book "Molecular biology of cell, 7th edition" (older ones are also good, but well).
But again, it's insanely complex and time-consuming process (notice, I didn't include frustration and nerves :-) )
Funny part comes in, when every detail costs 10000x more than one step lower (Pipettes. PET pipette 100x costs 1$. Normal pipette 15 cents each. Look for dual channel pipettes which you'll need.. $800 starting price) (same goes for almost everything..) Hardware for sequencing is "not that expensive" (if compared to other things), but other things are just ...
All the best wishes and sorry for spam.
Пластиковые контейнеры подходят не любые. Многие плавятся или деформируются при 120 градусах. Нужны полипропиленовые (PP) или термопластиковые (PET) контейнеры. Заявлено, что они выдерживают соответственно до 160 и 225 градусов без деформации. Я пока в поиске таких контейнеров.
PP - похоже на правду, а вот с PET есть сомнения... Давно это было, но насколько помню, захотелось мне фильтрануть парафин, а при комнатной температуре это не сделать, а и запихал его в духовку, выбрав в качестве воронки обрезок от PET бутылки из-под кваса. Результат оказался так себе по причине того, что PP банка из-под сметаны, куда стекал парафин, все выдержала нормально, а вот воронка оказалась существенно меньше и тупо провалилась в эту банку.
И они будут долго храниться?
Неорганика - неограниченно :) с органикой видимо нужно идти на те же ухищрения со стерильностью. В гидре все хранится в маточных растворах, кроме микроэлементов (ибо там органические хелаты).
В принципе да. Удобрения же тоже в виде растворов... Спасибо за совет, надо будет попробовать.
Неорганика даже с определенным количеством ПАВ или ядовитой органики может забобриться за милую душу. Если и советовать такое, то даже простые солевые растворы хранить только в холодильнике, а культуральные среды - открывать и закрывать ТОЛЬКО под ламинаром, горлышки тары стерилизовать и заматывать парафильмом поверх крышки. Желательно, чтобы холодильник для реактивов был отдельный от пищи, чисто по ТБ.
... и еще всё хранить в стеклянной посуде
Мои гидропонные маточные растворы (все стандартно - нитраты калия, кальция, аммония, сульфат магния и калия, фосфат калия) - хранятся в пластиковых бутылках под раковиной на кухне, в около-предельных концентрациях натурально годами, без соблюдения стерильности. Фубли в растворах не обнаружено :)
Ну значит, вы все правильно делаете. Я в свое время успел повидать заросты в растворах PBS, SDS (?!), Tween (!!!), как-то умудрялся позеленеть контур охлаждения насоса хроматографа, который мы заполняли сначала 50% этанолом, потом 10% ацетонитрилом. Так что я привык верить не в достаточно стерильные условия, а в достаточно устойчивую жизнь :)
только в холодильнике, лучше делайте небольшие объемы, для солей железа лучше отдельно делать, иначе в осадок выпадет. Нужно будет поискать и скинуть Вам на почту немного материала для облегчения жизни
Вот да. Сульфат железа через несколько часов выпадает в осадок и становится не пригоден для использования. Советуют хелатировать, подкислять, подщелачивать... Четкого понимания, как можно его хранить у меня так и не сложилось. Буду благодарна вам за информацию ??
Не знаю, как с орхидеями, но обычные растения есть железо могут только в хелатной форме.
Как я понимаю, хелатирование - это способ удержать железо в II-валентной форме, которая как раз усваивается растениями. В не хелатной форме оно тоже усваивается, но быстро окисляется до III-валентного и становится недоступно растениям.
Не вижу, в ламинаре есть УФО? Если нет, лучше его завести, особенно учитывая, что у вас не культуральный блок с очищенным воздухом, а просто комната.
За увлечение респект, единственное что, покупка разнообразной химпосуды и точных весов - это хороший такой красный флаг для ФСКН, поэтому будьте аккуратнее.
Полуофф. У автора оказался Youtube-канал, где можно увидеть иллюстрации из этой статьи в динамике.
Например Адская магнитная мешалка в 11:07
Помню в советское время видел в подмосковном институте шкафы, заполненные трясущимися колбочками и пробирками с рядами растущих на питательном субстрате микроскопических растений. Так выращивали здоровые саженцы чуть ли не из одной клетки. Растения получались здоровыми и с заданными параметрами. От них получали нужные сельскому хозяйству семена.
Насколько лет назад видел то же помещение, свет не горит, шкафы выключены...
Эх... Будем возрождать ту хитрую науку ?
Будущее за гражданской наукой!
Потрясающе ! Особенно учитывая что этим занимается девушка ! Утащил в закладки, и жду продолжения темы !
Этиловый спирт я тоже использую. Причем в различных экзотических формах. Сейчас делаю для этого холодильник на мощном элементе Пельтье под 25-литровую банку. Дело в том что саке например должно бродить при температуре не выше 12 градусов. В Японии даже есть поговорка - "Чем холодней зима, тем лучше саке". Некоторые сорта пива готовятся тоже только при низких температурах. Хочу чтобы ящик холодильника так же выполнял функцию стерильного бокса, для работы с чистыми культурами дрожжей и грибком кодзи. Правда думал делать его без продувки, а как перчаточный бокс. Но с продувкой как у Вас наверно будет даже лучше. Кстати не подскажете, как Вы делали для своего ламинара стерилизующий фильтр ???
оО, как интересно) пиво я тоже люблю) Фильтр - заказала HEPA у производителя. Класс очистки H14.
Отличная работа!
Как биотехнолог, я очень рада, что наша отрасль пополняется не только специалистами, но и энтузиастами!
От себя добавлю, что в агар для микроклонального размножения добавляют гибереллины и ауксины (преимущественно первые), для более быстрого роста. Так при контаминации растение будет более готово встретить инфекцию)
Плюс коллега, работающая на микроклонах, вместо щамацючивания в спирте иногда использует что-то вроде опрыскивания или отпаривания спиртом ростков, но я честно не знаю, как она это организовала)
А вот с пробирками, которые закрываются резиновыми пробками, а также с пластиковыми контейнерами вопрос пока открыт.
Попробуйте пакеты для стерилизации. Стерилизовать пробирки отдельно, крышки отдельно, потом собирать в ламинаре. Пробирки можно либо в пакете тоже, либо фольгой накрывать, либо всё вместе (оптимально). Пластиковые пищевые контейнеры делаются в основном из полипропилена, должны выдерживать (не те, в которые мороженое фасуют, а нормальные, толстые, для хранения пищи).
Чтобы в автоклаве не выбивало пробки из пробирок (и не срывало закатанные крышки с банок тушёнки), предварительно надо его накачать воздухом до двух атмосфер, например велонасосом. Конкретно ваша модель это скороварка, в нормальном автоклаве в процессе работы пар не стравливается (кроме аварийного превышения давления), а температура удерживается термостатом, который управляет нагревателем.
Домашняя биотехнологическая лаборатория — начало