Комментарии 57
Борьба с заражением — это тема для отдельного поста. Я провел уже более 50 экспериментов, пробовал и различные антибиотики и меристему доставать и много чего ещё.
Не пробовали сделать посев патогена на резистентность к антибиотикам?
На чашку Петри на богатую среду сеется исследуемый патоген. В среде делаются лунки в которые вносятся растворы антибиотиков, и ждете пока культура вырастет, потом смотрите зоны стерильности вокруг лунок.
При работе со стерильностью в микробиологии стараются манипуляции проводить вблизи горящего пламени, которое дает условную стерильную зону. При этом фильтрацию воздуха обычно не делают, по крайней мере в тех лабораториях где это видел.
Я сейчас этим занимаюсь. Патоген капризный, не хочет особо на среде для растений расти. Пришел заказ с агаром для бактерий, буду пробовать еще
Там по средам для бактерий есть нюансы:
Есть среды богатые, универсальные, на которых по идеи должно расти большинство бактерий. Для Вашей проверки нужна такая.
Есть среды бедные, на которых по сути только сама "подложка" для роста, но питательных веществ нет вообще. Они используются когда нужно проверить усвоение бактериями какого-то специфического субстрата. Например берется бедная среда в которой "нечего жрать" и добавляется нафталин. Соответственно вырастут только те, кто способен жрать нафталин (да, такие бактерии существуют, это не метафора).
А патоген именно бактериальный? Возможно ли с вирусом бороться?
А ионизирующими излучениями его не получится вывести? Насколько я знаю, в С/Х обрабатывают семена гамма-лучами
Их ради мутагенности обрабатывают что бы получить новый сорт а не против бактерий. Доза способная убить бактерии скорее всего стерилизует семена намертво.
Вот, например: https://corad.tech/processing_seeds "услуга: Антимикробная радиационная обработка семян и зерна"
Как я понимаю, сейчас большинство продуктов питания так обрабатывается, потому что для производителя это намного проще. Пропустил пачку молока мимо источника - и оно не портится 2 недели.
Молоку не надо прорастать.
все специи таким образом обрабатываются, но их тоже не сажают. хотя кмк все от дозы зависит
Продукты питания и семена для выращивания это немного разные вещи.
По вашей же ссылке одна из целей прописана как стерильность гибридов f1. Там не только убиваются микробы, а еще и сами семена стерилизуются что из них уже не вырастить ничего.
Можно долбануть радиацией в щадящем режиме для увеличения урожая но с антимикробной обработкой это имеет мало общего.
Грандиозно! Уолтер Уайт отдыхает.
Больно смотреть на попытки сделать стерильный бокс из дерева и его производных.
Скрытый текст
Представляю, как с данных позиций бактерии и грибы десантируются вам в субстрат на попутном ветре =)
Гляньте, как микологи делают стерильные главбоксы. Аквариум из оргстекла или большой пластиковый контейнер подходят куда лучше. Кто-то и из силикатного стекла делает, но никак не из дерева.
Мысль здравая, спасибо. Я как-то не задумывался. В следующих работах учту. Не знаю, правда, на сколько это критично и как скоро может выстрелить. Я вдохновлялся вот этими ребятами: https://youtube.com/@explore.express.experience3243 и https://youtube.com/@nextagro. Они из дерева делали
Они из дерева делали
Похоже на карго-культ :) Я бы засомневался в понимании этими ребятами технологии.
Делать нужно из того, что легко стерилизуется и не пригодно в пищу. Дерево не подходит по обоим пунктам, лучше металл. Оргстекло хорошо тем, что не портится от ультрафиолета, хотя, если не ошибаюсь, бактерицидную часть спектра оно блокирует, так что uvc лампу все равно надо размещать внутри.
Вы молодец, что попробовали сделать сами. Но можно б/у купить за 50-200к
Из простейшего думаю вам хватит https://www.lamsys.ru/catalog/ptsr-boks/bav-ptsr-laminar-s/
ДСП плесенью мгновенно покрывается при замачивании. Однажды я видел как из ДСП вырос настоящий гриб.
Вот такой материал мне нравится, все интересно и подробно. Все хочу начать что-то выращивать, а тут прям целый гайд на свою лабу. Обязательно вернусь к материалу, когда потянет к растениям и даче на старости лет.
Удачи в ваших делах, надеюсь ваше дело будет расти)
Если добавить ещё уровень чистоты(пластиковую комнату с положительным давлением и использовать костюм) плюс биореактор, то можно просто растить культуру клеток. Японцы табак давно выращивали. Очень хороший материал. Спасибо. Ещё!
"Версии сыра" - это звучит круто.
А кстати сейчас в магазинах появилось много Бри и Камамбера недорогих, и они прям неплохие. Ну для ценника в 200 р конечно.
МДФ с хепа-фильтром внутри - это мощно (ну, выше уже сказали). Только металл, и его сразу отравить весь. Травить 70% спиртом - это хорошо, но такоэ. Ламинар много и часто УФ-ить хорошей лампой, травить 96% спиртом или изопропанолом, после работы - 6%-й перекисью и плотно закрывать, при входе в ваш бокс надевать халат и переобуваться через барьер. Помещение тоже желательно УФить. В самом ламинаре работать в медицинских перчатках, протирая руки спиртом. Выполняя эти предписания, вы не только минимизируете возможность, что что-то забобрится, но и сможете работать с культурами клеток (может быть, захотите двигаться в этом направлении, вы, похоже, увлекающийся человек, но перенять лабораторные практики настоящих культуральных блоков для этого совсем не помешает).
"Пипетатор" все-таки называют дозатором, и читателям может быть не понятно сразу, что жидкость вы им набираете в одноразовый носик (как на КДПВ). Он, кстати, ограничивает объем набираемой жидкости, поэтому сподручно держать пару-тройку дозаторов нужных объемов. Если у вас большие объемы сред или иных жидкостей, купите одноразовые серологические пипетки и ламинарный пистолет-дозатор для них, им удобно отсосать среду или жидкость и слить в банку слива, не доставая ничего из ламинара.
По работе со скальпелями и горелкой все правильно, горелка тоже правильная (Боже упаси купить металлическую закрытую горелку - это готовое BLEVE с последствиями от резкого пшика до фатального пожара). Самое горячее место пламени - две трети от высоты (самое яркое место), но воздух над/за пламенем стерильный (это если нужна стерильность вещей, которые от пламени поплавятся).
За идеи и энтузиазм - респект и плюсы. Только с плесенями поаккуратнее.
Эх, а советские скороварки на газу тоже BLEVE? Насколько их безопасно использовать при условии исправности клапанов?
Никогда не сталкивался с ними, но вряд ли. Судя по всему, там газ изначально горит, и такого быть не должно.
В спиртовках же горит промоченный спиртом фитиль. В стеклянных спиртовках как у автора он затыкает сосуд сверху, у сосуда нагревается разве что горлышко. Я имел дело с металлическими сосудами похожей формы, но из-за цельнометаллического и тонкостенного исполнения там сильно нагревается весь верх горелки. Когда спирта становится мало, он испаряется от тепла и летает в верхней части горелки, а потом когда стенка достигает температуры вспышки, происходит небольшой взрыв. Мне с коллегами везло - был просто фырк пламени, иногда выблевывало фитиль. Но ничто не мешает смахнуть горелку рукой от испуга, и это уже лужа горящего спирта.
Когда-то давно я читал байки про суровых советских мотокроссеров, которые на соревнованиях подваривали бензобак, не опустошая его и выгоняя пары водой, а наоборот, заливая бензин доверху и поджигая горловину. Если у вас нет объема, в котором копится газообразное горючее, то взрыва не будет. Если в скороварке исправен поджиг, то газ не скопится.
Советская скороварка отлично подходит для стерилизации и при исправных клапанах безопасна. Для стерилизации стеклянной тары на дно желательно класть кусок ткани, вроде махровой салфетки.
Насчёт реагентов и расходников со сроком годности - в ТГ есть чат "Утилизация | Н-Коммуна", где можно заполучить или обменять остатки и просрочку, которая всё ещё работает, но непригодна например для медицинской лаборатории.
Интересно, как грибы не заражают все вокруг. Или пока не заражают? Вы же не в одном боксе со всеми культурами работаете?
ПС фраза - Сначала я извлеку из материнских растений настоящего васаби почки - сильно повесили. Спасибо за интересную статью, и работу.
У живых организмов есть противоборствующая сила — иммунитет. Когда он страдает, например при СПИД-е, сразу куча болезней проявляется. А стоит помереть, так вообще не пройдёт нескольких дней как микробы возьмут своё.
Интересно, как грибы не заражают все вокруг. Или пока не заражают?
Именно, что заражают. Надо исходить из того, что любая чистая подходящая среда будет колонизирована, как только произойдет контакт.
НО! Мир вокруг так интересно устроен, что жизнь вокруг нас кипит. Нет ничего "пустого". Везде все уже занято. И вот эта конкуренция за питательные элементы и балансирует все вокруг (если это не паразитический случай). Она не только лишь пассивная, но часто и активная, когда одна колония выделяет специальные вещества лишь для того, чтобы подавить рост/развитие конкурентов.
О, крутой пост. И автор радует и комментаторы. Очень интересно и вдохновляюще.
Аккуратно обращайтесь с фитогормонами. В своем абсолютном большинстве они являются сильными мутагенами и потенциальными канцерогенами, не имеющими безопасных доз. Та же ИУК подтверждена, как мутаген в экспериментах на млекопитающих. И среди орхидейщиков, имеющих постоянное дело с этими субстанциями, очень много случаев онкологии, причем главным образом -- молниеносно развивающегося и не поддающегося лечению рака печени.
Погодите, это те жидкости для опрыскивания растений, которые продаются в садовых магазинах? Эпин и т.п.?
А есть информация, они через кожу поступают, аэрозольно или в виде испарений?
Могли бы вы поподробнее рассказать откуда информация, а то я скинул своим знакомым цветоводам и там сильно забеспокоились. В дачных магазинах много препаратов из класса фитогормонов продаётся и люди их применяют без особых предосторожностей.
фитогормонами. В своем абсолютном большинстве они являются сильными мутагенами и потенциальными канцерогенами
Аааа???
"Фитогормоны. Основные группы классических гормонов: Абсцизины, Ауксины, Цитокинины, Этилен, Гиббереллины"
Вот это было бы неожиданно. Мы, такие, поедаем тысячи лет все эти растения, а у них там канцерогены курсируют.
А вот то, что применяют для мутаций в исследованиях:Известно множество химических соединений, обладающих мутагенной активностью: алкилирующие препараты, перекиси, гидроксиламины, аналоги оснований ДНК, соли тяжелых металлов, некоторые ароматические соединения (алкалоиды, лекарственные препараты, гербициды) и др. Большую группу химических мутагенов представляют алкилирующие соединения. В настоящее время в практике научных исследований широко применяют следующие мутагены: нитрозопроизводные мочевины — нитрозометилмочевина (НММ), нитрозоэтилмочевина (НЭМ), нитрозодиметилмочевина (НДММ); этиленимин (ЭИ), этилметансульфонат (ЭМС), диметилсульфат (ДМС), 1,4-бисдиазоацетилбутан (1,4-ДАБ), колхицин и др.
Из приведенного обзора физико-химических свойств мутагенов видно, что все химические мутагены токсичны. Большинство из них не только сильные яды, но и канцерогены. Поэтому препараты разрешены для использования только в научных учреждениях с соблюдением соответствующих мер безопасности.
Видел аналогичные работы еще в советских институтах. Тогда для меня это выглядело как магия.
PS если производить меристемные растения для аквариума, можно неплохо заработать
Александр, а расскажите, пожалуйста, об организации жизни и времени на всё это. Я восхищен вашими проектами и понимаю сколько времени требуют такие хобби. Но вы ведь ещё когда-то успеваете и в IT работу работать? Когда и как вы всё это успеваете?
Спирт прекрасно получается в домашних условиях с помощью доработанной скороварки )) Будет попутное производство, но есть опасность полностью отвлечься на него от основной темы ))
Сейчас я считаю, что толщина в 150 мм — это много
О нееееет. Я вот сэкономил по незнанию. И тысячу раз пожалел. Даже и не подумал, что 78 мм может быть недостаточно. Нет, ну в этом есть свой плюс, конечно. Вследствие этого я неделями я "изучал" аэродинамику, 3Д моделирование, бесконечно запускал симуляции движения воздуха в SolidWorks.. :) Пытался внутри бокса воздушный "разветвитель" сделать (напечатанный на 3D принтере), чтобы таки добиться (безуспешно) того, чтоб воздушный поток был действительно ламинарным. :) К счастью, для моих целей (микологических) оказалось достаточным и так, как вышло.
Сухожар. Это такая электро-духовочка для стерилизации предметов.
А я приспособил самый обычный электрический аэрогриль для этого дела (круглый стеклянный). Вообще, на практике удобней применять либо полипропиленовые контейнеры, либо низкие стеклянные баночки twist-off -- заливать среду и сразу автоклавировать. Но если хочется именно стеклянные чашки Петри для экспериментов, где важен полный визуальный контроль, то я заворачиваю их в бумагу для запекания, закладываю в этот аэрогриль и .... "прожариваю до корочки". :) Но и потом под ламинаром останется разлить по ним среду и дать отстояться.
Естественно, если вы не знаете пока, как именно будете применять микроскоп, то раньше времени его покупать нет смысла. Оба микроскопа я брал на алиэкспрессе и ни о чем не жалею.
Вот и я вначале сомневался. То ли "непонятно что" на Али заказывать, то ли сразу что-то подороже с нормальными объективами. Начитался всякого про высокое качество оптики старых советских биологических микроскопов... В итоге решил взял с рук старенький, но полностью рабочий МБР-1.
И, хоть я такое и не планировал, но на какое-то время прям втянулся в идентификацию различных колоний плесневых грибов. Всех, которые мне попадались. Морфология колоний, строение клеток. Часами так зависал. Рассматриваешь, запоминаешь, потом перебираешь массу изображений в интернете, в каталогах, на researchgate. net... Прям как расследования какие-то.
Там, например, фузариум растение "сожрал", вот его макроконидии, а свет спор розоватый. Здесь вот в субстрате нейроспора "вылезла". А вот тут триходерма, которую сам же выращивал раньше для растений, теперь мне уничтожает рейши, эринги и ежовик гребенчатый.
В общем, все это может быть очень увлекательным, если зацепит.
Тема интересная, к сожалению, по существу первые пару и последний абзац, основное содержимое - автор хватается оборудованием
Очень интересная тема, много подробностей и фишек, благодарствую!
Материнские растения, из которых я беру образцы для введения в культуру имеют внутреннее бактериальное заражение
Может быть попробуете вырастить несколько поколений материнских растений, последовательно улучшая их иммунитет, их здоровье. Может так они сами победят бактерии. Либо подсадить на них грибы или бактерии полезные, которые устранят заражение.
Ещё вопрос, возможно Вы знаете. Есть ли химикат, устраняющий простейшие грибы, но не трогающий высшие грибы? Чтобы убирать плесень с кусочков мицелия гриба.
...А из-за массивного, устрашающего и наводящего на мысли о Мордоре забора на человека, мучающегося с полипропиленовым мангалом, поглядывает сосед со сварочным аппаратом. У него - свой путь. - извините, навеяло постом и каментами...
Но вообще - восхищён! И, кстати, для стерилизации (хотя, наверное, скорее, дезинфекции) рекомендую посмотреть озонаторы. Они есть на алике, как в виде запчастей, так и готовые аппараты разной производительности.
Микроклональная лаборатория своими руками