Организм человека — это совокупность систем, которые работают совместно для поддержания в нем жизни. Каждый из органов, выполняя свою функцию, влияет на работу других. Выделить какой-то орган и поставить его на пьедестал первенства по важности довольно сложно, ввиду вышеописанной взаимосвязи. Тем не менее одним из лидеров этого воображаемого рейтинга является сердце. Некоторые заболевания сердца имеют как прямые и моментальные последствия, так и косвенные и долговременные, что могут вызывать летальный исход. Ученые из Калифорнийского университета в Сан-Диего (США) разработали новый метод предотвращения сердечной недостаточности, вызванной инфарктом миокарда, основанный на инъекции из протеиноподобного полимера. Что входит в состав данной инъекции, как именно она работает, и насколько она эффективна? Ответы на эти вопросы мы найдем в докладе ученых.
Основа исследования
Сердечная недостаточность (СН или HF от heart failure) поражает, по оценкам, 6.7 миллиона людей старше 20 лет только в США, причем ошеломляющие 52.6% из них умрут в течение 5 лет. Инфаркт миокарда (ИМ или MI от myocardial infarction) является наиболее значимой причиной СН и связанной с ней заболеваемости и смертности. Каждый год только в Соединенных Штатах происходит около 605000 новых приступов в дополнение к 200000 повторных приступов. Эти статистические данные подчеркивают необходимость разработки терапевтических средств, которые помогут предотвратить прогрессирование СН после ИМ. В частности, после острого ИМ происходит обширная воспалительная реакция, в конечном итоге приводящая к фибротическому рубцу. Более того, один из вариантов острого лечения ИМ включает реперфузию. Это приводит к значительному воспалению из-за притока кальция и образования свободных радикалов, таких как образование реактивных форм кислорода. Кроме того, этот окислительный стресс может привести к реперфузионному повреждению, которое может привести к дальнейшему повреждению миоцитов, дисфункции эндотелиальных клеток и дальнейшему негативному ремоделированию левого желудочка (ЛЖ или LV от left ventricular), что наблюдается у пациентов. Таким образом, окислительный стресс играет важную роль в патофизиологии ИМ. Поэтому, несмотря на огромную клиническую потребность, отсутствуют варианты лечения, направленные на профилактику и устранение повреждений, вызванных острыми сердечными ишемическими событиями.
Изображение №1
Фактор 2, связанный с ядерным фактором эритроида 2 (Nrf2), является фактором транскрипции, который регулирует гомеостатический ответ на клеточный окислительный стресс. Путь Nrf2 является цитопротекторным посредством активации элементов антиоксидантного ответа (ARE от antioxidant response element), которые расположены в качестве промоторов вблизи многих антиоксидантных генов (1A), таких как НАД(Ф)Н-хинондегидрогеназа 1 (Nqo1) и гем-оксигеназа 1 (Hmox1). Однако активация пути Nrf2 происходит только в условиях окислительного стресса. В нормальных условиях Nrf2 деградирует посредством белок-белкового взаимодействия с Kelch-подобным ECH-ассоциированным белком 1 (Keap1). Keap1 взаимодействует с Neh2 доменом Nrf2 через два домена Kelch. Двухточечное взаимодействие стабилизирует связывание Keap1/Nrf2 и обнажает полилизиновую область, которая убиквитинируется Keap1, маркируя Nrf2 для протеасомной деградации.
Было предпринято много попыток разработать терапевтические средства для ингибирования Keap1 и, таким образом, активации пути Nrf2 для различных заболеваний, таких как нейродегенеративные заболевания, хронические заболевания почек и, в частности, для инфаркта миокарда. Исследования показали быстрое прогрессирование сердечной недостаточности после инфаркта миокарда у мышей с нокаутом Nrf2, в то время как гиперактивация Nrf2 у мышей привела к кардиопротекции в модели СН, вызванной изопротеренолом. Другие исследования инфаркта миокарда с участием мышей с нокаутом Nrf2 показали, что макрофаги Nrf2+ приводят к нисходящим противовоспалительным каскадам, демонстрируя перспективность иммуномодуляции при инфаркте миокарда. Кроме того, исследования с использованием небольшой молекулы ингибитора Keap1 (DH404) показали, что лечение привело к снижению уровня предсердного натрийуретического пептида (ANP от atrial natriuretic peptide) и фибронектина, при этом в целом значительно снизилось отрицательное ремоделирование левого желудочка (ЛЖ) после инфаркта миокарда у крыс. Поэтому предполагается, что активация Nrf2 посредством ингибирования Keap1 может привести к врожденной кардиопротекции и иммуномодуляции в условиях острого инфаркта миокарда, что приводит к улучшению сердечной функции.
Хотя были разработаны и клинически используются для лечения других заболеваний малые молекулы, нацеленные на Keap1/Nrf2, эти ингибиторы сталкиваются со значительными проблемами, связанными с нецелевыми эффектами, из-за неспецифического нацеливания на Keap1. Фактически, многие из этих малых молекул являются электрофилами, которые действуют на сенсоры окислительного стресса цистеина Keap1, а не на специфические домены Kelch, с которыми напрямую взаимодействует Nrf2. Для борьбы с этим и для более специфичного нацеливания на большую площадь поверхности нативного PPI были исследованы пептидные терапевтические средства. К сожалению, пептиды страдают in vivo от ограниченной биоактивности и клеточного поглощения, что имеет решающее значение для этой внутриклеточной цели.
Недавно ученые описали новую терапевтическую платформу, использующую белковоподобные полимеры (PLP от protein-like polymer) для нацеливания на Keap1/Nrf2 PPI. PLP представляют собой щеточные полимеры, которые отображают биоактивные пептиды вдоль гидрофобного остова, полученного посредством живой полимеризации с прививкой (1B). Сочетание гидрофобного остова и гидрофильных пептидных боковых цепей дает протеиноподобную структуру, обусловленную гидрофобным эффектом (1C), которая придает устойчивость к деградации и свойства проникновения в клетки. Кроме того, эти биоматериалы обеспечивают многовалентное отображение пептидов, что приводит к высокой эффективности и специфичности для желаемых целей. В то время как другие использовали другие синтетические материалы как для нацеливания, так и для лечения ИМ, авторы исследования специально использовали PLP для пассивного нацеливания ИМ, одновременно используя путь Keap1/Nrf2 для лечения ИМ.
В рассматриваемом нами сегодня труде ученые опираются на эту работу, используя PLP, ингибирующие Keap1 (Keap1i-PLP), в модели заболевания, в частности, вводя PLP после инфаркта миокарда крысам для улучшения функции сердца (1D).
Результаты исследования
Изображение №2
Keap1i-PLP, вместе с полимерами скремблированного контроля, были синтезированы, как описано ранее (1B). Вкратце, пептид Keap1i (LDPETGEFLRRRR – полученный из мотива связывания ETGE Nrf2) и пептид скремблированного контроля (DELEPLTGFRRRR – рандомизированный мотив ETGE с сохраненным повтором аргинина на C-конце) были конъюгированы с N-(гексановой кислотой)-экзо-5-норборнен-2,3-дикарбоксимидом на их N-концах посредством твердофазного пептидного синтеза. Эта модификация устанавливает полимеризуемый фрагмент норборнена в незащищенный пептид с пятиуглеродным спейсером между ними для улучшения кинетики полимеризации.
Очищенные, дезащищенные пептидные мономеры впоследствии полимеризовали посредством метатезисной полимеризации с раскрытием кольца (ROMP от ring-opening metathesis polymerization) для получения PLP точных молекулярных масс с низкой полидисперсностью, содержащих поли(норборнилимидный) остов. Этот остов был выбран, поскольку было показано, что он обеспечивает полезные биологические свойства, такие как устойчивость к ферментам, по сравнению с PLP с альтернативными остовами.
Все полимеры были очищены до характеризации материала. Молекулярную массу, дисперсность и степень полимеризации определяли с помощью водной эксклюзионной хроматографии с многоугловым рассеянием света (SEC-MALS от size-exclusion chromatography with multi-angle light scattering), а также с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE от sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis).
Флуоресцентные Cy5.5-меченые PLP синтезировали параллельно с каждой партией для использования в исследованиях биораспределения. PLP были проверены на биохимическую активность с использованием анализа связывания Kelch TR-FRET и анализа репортера ARE-Luciferase HepG2 (2A–2C). Анализ связывания Kelch TR-FRET подтвердил, что Keap1i-PLP проявляют пикомолярное ингибирование (IC50 = 166.8 пМ) домена Keap1 Kelch, в то время как скремблированный контроль не действует как ингибитор (2A). Это указывает на то, что ингибирование Keap1 PLP происходит специфическим для пептидной последовательности образом, и между Keap1 и самой полимерной основой нет неспецифических взаимодействий.
Кроме того, Keap1i-PLP были проверены на активацию пути Keap1/Nrf2-ARE в анализе репортера люциферазы (2B), в то время как Scramble-PLP не показал активации пути. Активация, вызванная стрессом, контролировалась с помощью параллельных анализов, в которых оба PLP поддерживали нецитотоксические уровни, что подтверждается жизнеспособностью во всех испытанных дозах (2C).
В микросреде места инфаркта задействованы различные клетки, и каждый тип клеток подвергается гибели в результате ИМ. После оценки общей цитосовместимости с клетками HepG2 (2C) ученые попытались установить цитосовместимость в наборе типов сердечных клеток, обработанных Keap1i-PLP (2D). Цитосовместимость оценивалась для первичных неонатальных кардиомиоцитов крысы (2D), макрофагов, полученных из костного мозга мыши, эндотелиальных клеток сердца крысы и фибробластов сердца крысы, где жизнеспособность сохранялась в пределах протестированных концентраций.
Учитывая, что кардиомиоциты являются одним из основных типов клеток, которые подвергаются значительному окислительному стрессу и клеточной смерти после инфаркта миокарда, кардиомиоциты затем подвергались воздействию трет-бутилгидропероксида для имитации окислительного стресса in vitro, при этом другие типы клеток также следовали той же временной шкале выживания (2E). Через шесть часов после воздействия перекиси кардиомиоциты обрабатывались Keap1i-PLP, а также контрольными образцами (носителем и 70% этанолом) в дозах от 0.01 нМ до 3 мкМ. Обработка Keap1i-PLP приводила к значительному спасению клеток при таких низких дозах, как 0.1 нМ (2F). В случае Scramble-PLP не было выявлено никакой активности в смягчении клеточной смерти при дозах от 0.03 до 3 мкМ.
Поскольку иммунные клетки также подвергаются окислительному стрессу, макрофаги были подвергнуты воздействию трет-бутилпероксида водорода, а затем Keap1i-PLP (0.001–3 мкМ), что показало защиту по сравнению с контролем-носителем во всем протестированном диапазоне концентраций PLP (2G). Аналогичным образом, спасение с помощью Keap1i-PLP наблюдалось для эндотелиальных клеток сердца крыс, подвергнутых воздействию пероксидов (2H).
Первичные кардиомиоциты были дополнительно исследованы на предмет корреляции спасения с клеточным ответом, опосредованным Nrf2. Здесь было обнаружено, что экспрессия генов Hmox1 и Nqo1, связанных с Nrf2, значительно увеличилась для кардиомиоцитов, обработанных Keap1i-PLP в низкой дозе 0.1 нМ и высокой дозе 3 мкМ (2I–2L). Никакого ответа, опосредованного Nrf2, не наблюдалось для групп, которым давали Scramble-PLP (2I–2J). Эта положительная регуляция генов, связанных с Nrf2, также наблюдается для обработанных Keap1i-PLP, здоровых (без воздействия перекиси) первичных кардиомиоцитов с суб-нМ потенциями (2K–2L). Эти пикомолярные клеточные потенции близко отражают биохимическую потенцию для этих PLP, где наблюдалось IC50 166.8 пМ (2A).
Протеомика масс-спектрометрии с тандемными массовыми метками (TMT-MS от tandem mass tagmass spectrometry) была проведена для оценки изменений в экспрессии белка после обработки PLP как для стрессированных, так и для нестрессированных кардиомиоцитов. Протеомный анализ выявляет надежный ответ, опосредованный Nrf2, с повышением регуляции ключевых генов пути Nrf2, таких как Hmox1, что было выявлено по увеличению содержания белка без предварительной обработки перекисью.
Изображение №3
Для оценки биораспределения Keap1i-PLP в модели инфаркта миокарда у крыс использовались Cy5.5-меченые Keap1i-PLP или Cy5.5-Scramble-PLP. Сначала ученые подвергли крыс инфаркту миокарда с последующей реперфузией, как описано ранее. Оба Cy5.5-меченых PLP вводили крысам через 1 день после инфаркта миокарда путем инъекции в хвостовую вену в дозе 7.5 мг/кг. Все органы были собраны на 5-й день после инфаркта миокарда и флуоресцентно визуализированы с помощью LiCoR Odyssey (3A). Оба контроля Cy5.5-Keap1i-PLP (3B) и Cy5.5-Scramble-PLP (3C) преимущественно удерживались в инфарктном ЛЖ по сравнению с правым желудочком (ПЖ). В целом, Cy5.5-Keap1i-PLP и их скрамблированные аналоги показали наибольшее распределение в почках, за которыми следовали печень, селезенка и легкие соответственно (3D, 3E), с репрезентативной флуоресценцией органов Cy5.5-Keap1i-PLP (3F) и Cy5.5-Scramble-PLP (3G). Это контрастирует с типичными наноматериалами, которые обычно показывают наибольшее распределение в печени и селезенке. Наконец, для подтверждения результатов накопления PLP в инфарктном ЛЖ, было проведено окрашивание α-актинина на криосрезах образцов, обработанных Cy5.5-Keap1i-PLP или Cy5.5-Scramble-PLP, где были измерены более высокое накопление PLP в инфарктной зоне (3H) по сравнению с отдаленной зоной (3I). Эти наблюдения согласуются с пассивным накоплением в ЛЖ из-за присущей этой ткани проницаемой сосудистой сети после ишемически-реперфузионного повреждения.
Изображение №4
Эффект лечения Keap1i-PLP после инфаркта миокарда был первоначально измерен в отношении острых нисходящих биологических эффектов. Здесь Keap1i-PLP вводили в дозе 3 или 7.5 мг/кг через 1 день после инфаркта миокарда через хвостовую вену и сравнивали с физиологическим раствором и контрольными препаратами Scramble-PLP (4A). Биоактивность измеряли с использованием специальной NanoString кардиологической панели для крыс, исследуя 374 соответствующих гена, связанных с сердцем и инфарктом миокарда, а также с использованием иммуногистохимии.
При сравнении обработки Keap1i-PLP в концентрации 3 мг/кг с физиологическим раствором было обнаружено в общей сложности 113 дифференциально экспрессируемых генов (15 с повышенной активностью, 98 с пониженной активностью) (4B). Эти гены были проведены через обогащение онтологии генов (GO от gene ontology), где были обнаружены термины GO, обогащенные воспалительной реакцией (Ccl2, Cxcl1, Il1b, Nupr1), хемотаксисом нейтрофилов (Cxcl1, Cxcl2, Tlr4), внешней инкапсулирующей структурой (Ptn, Ccn2, Pf4), связыванием рецептора хемокина CXCR (Pf4, Cxcl1, Cxcl2) и связыванием гликозоаминогликанов (Ptn, Ccn2).
Стоит отметить, что 3 мг/кг Keap1i-PLP вызывают значительные воспалительные эффекты, особенно с маркерами хемокинов (Cxcl1, Cxcl2), наряду с сигнализацией Il1b. Для сравнения, при оценке контроля Scramble-PLP было обнаружено 29 дифференциально экспрессируемых генов (5 с повышенной регуляцией, 24 с пониженной регуляцией) без обогащенных терминов GO. В то время как Scramble-PLP демонстрировал высокую активацию макрофагов (Adgre1), в целом наблюдалась минимальная транскрипционная активность по сравнению с введением Keap1i-PLP.
Затем ученые провели прямое сравнение как 3 мг/кг Keap1i-PLP, так и скрамблированного PLP, где таким образом было обнаружено 9 дифференциально экспрессируемых генов и никаких обогащенных терминов GO. Все дифференциально экспрессируемые гены были связаны с обработкой Scramble-PLP, с заметной экспрессией Pdgfc, которая связана с антиапоптотической активностью, особенно в макрофагах.
Имея знания о биологической активности in vivo для 3 мг/кг Keap1i-PLP по сравнению со Scramble-PLP, ученые дополнительно оценили Keap1i-PLP при 7.5 мг/кг, чтобы определить, будет ли более высокая доза успешно способствовать более противовоспалительным, прорепаративным реакциям.
При сравнении лечения 7.5 мг/кг Keap1i-PLP с физиологическим раствором ученые обнаружили в общей сложности 117 дифференциально экспрессируемых генов (33 с повышенной регуляцией, 84 с пониженной регуляцией) (4C), что было аналогично по количеству дифференциально экспрессируемых генов, присутствующих при дозировке 3 мг/кг. Затем эти гены провели через обогащение GO, где обнаружили термины GO, обогащенные регуляцией запрограммированной клеточной смерти (Agtr1a, Itgb1, Ptn, Igf1, Fas), ангиогенезом (Tgfb2, Vegfc, Vcam1), воспалительной реакцией (Cxcl1, Notch2, Tnfrsf1a, Nupr1), связыванием рецепторов цитокинов (Tgfb3, Adam17, Cxcl1, Vegfc), связыванием TGFβ (Tgfb2, Tgfb3, Tgfb2r) и коллагенсодержащим внеклеточным матриксом (Tgfb2, Tgfb3, Itgb2, Ang).
Обогащенные термины GO предполагают, что Keap1i-PLP влияет на иммунный ответ, отложение фибробластов и ECM, а также рост эндотелиальных клеток. Было обнаружено, что подавленные гены обогащены в клеточном дыхании и аэробном дыхании (Idh2, Fh, Cs), наряду с апоптотическими процессами (Diablo, Nrp1). Кроме того, была дополнительно подтверждена активация в рамках сигнального пути для животных, получавших 7.5 мг/кг Keap1i-PLP по сравнению с контрольными животными, получавшими физиологический раствор. Повышенная экспрессия Hmox1, ключевого гена пути Nrf2, была замечена для животных, получавших Keap1i-PLP в дозе 7.5 мг/кг, но не было измерено никакой значимости для Gclm и Nqo1. Кроме того, зная, что уровни цитоплазматического Nrf2 истощаются при ингибировании Keap1, ученые исследовали уровни цитоплазматического Nrf2 в инфарктной миокардиальной ткани с помощью ELISA, где был обнаружен более низкий уровень цитоплазматического Nrf2 при введении Keap1i-PLP по сравнению с физиологическим раствором.
Для дальнейшего изучения механизмов, лежащих в основе прорепаративного ответа, наблюдаемого у животных, обработанных Keap1i-PLP, ученые изучили влияние иммуномодуляции, апоптотических путей и васкуляризации, все из которых являются значимыми терминами GO из данных NanoString. Таким образом, ученые провели иммуногистохимический анализ тканей, собранных в момент времени 5-й день (4A). Иммуногистохимия для расщепленной каспазы-3, маркера апоптоза, показала сниженное количество апоптотических кардиомиоцитов по сравнению с физиологическим раствором (4D). Как показано с помощью панели NanoString, Keap1i-PLP также должны были способствовать ангиогенезу (Vegfc+) посредством активации Nrf2. Было показано, что образцы от животных, обработанных PLP, имели повышенную плотность артериол, что указывает на спасение сосудов, поскольку известно, что эндотелиальные клетки подвергаются апоптозу после инфаркта миокарда (4E).
Наконец, было показано, что Nrf2 играет роль в переключении фенотипа макрофагов. Активация Nrf2, в частности, может ингибировать поляризацию макрофагов типа M1, связанную с повреждением тканей после инфаркта миокарда, и приводить к иммуномодуляции, способствуя развитию фенотипа M2. Поэтому ткани, взятые у животных, были окрашены для количественной оценки поляризации макрофагов типа M2. Сначала было проведено окрашивание на клетки Cd68+, где было выявлено большее количество макрофагов по сравнению с обработкой физиологическим раствором (4F). Повышенное количество макрофагов типа M2 (Cd163+) также было обнаружено в инфаркте животных, получавших лечение PLP (4G). Эти результаты демонстрируют способность поляризовать макрофаги до противовоспалительного состояния при введении Keap1i-Nrf2.
Изображение №5
Имея доказательства активации пути Nrf2 после внутривенного введения Keap1i-PLP в дозе 7.5 мг/кг, ученые приступили к исследованию терапевтической эффективности Keap1i-PLP. Крысы подвергались инфаркту миокарда, как описано ранее, с сопутствующим базовым тестированием ключевых функциональных показателей сердца, определенных с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ): фракция выброса (EF от ejection fraction), конечный систолический объем (ESV от end systolic volume), конечный диастолический объем (EDV от end diastolic volume) и толщина стенки инфаркта. EF является мерой процента крови, выкачиваемой из левого желудочка при каждом сокращении, и является показателем, клинически используемым для оценки тяжести сердечной недостаточности. Истончение стенки обычно наблюдается при отрицательном ремоделировании ЛЖ, связанном с инфарктом миокарда, и может способствовать снижению сердечной функции. Кроме того, как отмечалось ранее, патофизиология после сердечного приступа приводит к образованию фиброзной рубцовой ткани в миокарде.
Таким образом, в дополнение к функциональным показателям, определенным с помощью МРТ, для количественной оценки процента фиброза использовалось трихромное окрашивание. В этих исследованиях через день после ИМ крысам вводили 7.5 мг/кг Keap1i-PLP или физиологический раствор (n = 10) посредством внутривенной инъекции в хвостовую вену (5A). Затем животных оценивали с помощью МРТ на 35-й день до сбора ткани.
При оценке через 5 недель было обнаружено, что абсолютное изменение EF между конечной точкой и исходным уровнем значительно увеличилось для группы Keap1i-PLP по сравнению с контрольной (5B). Кроме того, лечение Keap1i-PLP значительно увеличивало толщину стенки (5C). Не было отмечено значительной разницы между этими группами в изменениях EDV или ESV. Однако, что примечательно, при сравнении здоровых (без ИМ) контрольных животных в 5-недельной временной точке, EF (5D) и ESV (5E) были статистически неотличимы от животных после Keap1i-PLP, хотя EDV увеличился (5F). Более того, было обнаружено, что толщина стенки ЛЖ (5G) является статистически значимой между группами лечения.
В дополнение к сердечной функции ученые также охарактеризовали размер инфаркта, гипертрофию кардиомиоцитов, фиброз и васкуляризацию. Хотя не было никаких различий в размере инфаркта или гипертрофии кардиомиоцитов (5H), как инфаркт (5I), так и интерстициальный фиброз (5J) были значительно снижены в группе Keap1i-PLP через 5 недель по сравнению с контролем. Примечательно, что в соответствии с данными NanoString, наблюдалось повышенное наличие артериол на единицу площади (мм2) для Keap1i-PLP по сравнению с физиологическим раствором (5K), наряду с уменьшением миофибробластов (5L), что дополнительно подтверждает ортогональную проверку данных NanoString.
Для более детального ознакомления с нюансами исследования рекомендую заглянуть в доклад ученых.
Эпилог
В рассмотренном нами сегодня труде ученые разработали новый метод предотвращения сердечной недостаточности, вызванной инфарктом миокарда. Данный метод основан на введении инъекции созданного ими протеиноподобного полимера.
Инфаркт миокарда является опасным как в кратковременной, так и в долгосрочной перспективе. Профилактика сердечной недостаточности после перенесенного приступа до сих пор является острой и нерешенной проблемой. Созданная учеными система позволяет блокировать взаимодействие двух ключевых белков, которые вмешиваются в реакцию организма на стресс и воспаление. Когда активируется белок Nrf2, клетки сопротивляются деградации, вызванной воспалением. Но KEAP1 связывается с Nrf2, чтобы в свою очередь его деградировать. После сердечного приступа этот процесс деградации необходимо остановить, чтобы ткани могли лучше функционировать. Платформа из протеиноподобного полимера, или PLP, сделана из полимера, который имитирует Nrf2. После внутривенной инъекции он находит KEAP1 и связывается с ним, не давая ему связываться с реальным белком Nrf2 и деградировать его.
Во время практических испытаний крысам после инфаркта вводили разработанный PLP или обычный физраствор. Через 5 недель было проведено МРТ исследование обеих групп грызунов. Те, которым вводили PLP, продемонстрировали значительно лучшую сердечную функцию, чем те, которым вводили физраствор.
В планах ученых провести оптимизацию своего творения, в частности повысить его эффективность и установить оптимальные дозировки. Далее они планируют приступить к тестированию на более крупных млекопитающих. Однако уже на данном этапе виден огромный потенциал данного исследования, которое может спасти множество жизней.
Немного рекламы
Спасибо, что остаётесь с нами. Вам нравятся наши статьи? Хотите видеть больше интересных материалов? Поддержите нас, оформив заказ или порекомендовав знакомым, облачные VPS для разработчиков от $4.99, уникальный аналог entry-level серверов, который был придуман нами для Вас: Вся правда о VPS (KVM) E5-2697 v3 (6 Cores) 10GB DDR4 480GB SSD 1Gbps от $19 или как правильно делить сервер? (доступны варианты с RAID1 и RAID10, до 24 ядер и до 40GB DDR4).
Dell R730xd в 2 раза дешевле в дата-центре Maincubes Tier IV в Амстердаме? Только у нас 2 х Intel TetraDeca-Core Xeon 2x E5-2697v3 2.6GHz 14C 64GB DDR4 4x960GB SSD 1Gbps 100 ТВ от $199 в Нидерландах! Dell R420 — 2x E5-2430 2.2Ghz 6C 128GB DDR3 2x960GB SSD 1Gbps 100TB — от $99! Читайте о том Как построить инфраструктуру корп. класса c применением серверов Dell R730xd Е5-2650 v4 стоимостью 9000 евро за копейки?
